Comment faire pour surveiller la croissance cellulaire

Comment faire pour surveiller la croissance cellulaire


Les scientifiques surveillent régulièrement la croissance cellulaire. Il peut être une partie de l'entretien régulier de la cellule, ou dans le cadre d'une expérience. Par exemple, un essai peut être configuré pour comparer les effets de trois médicaments différents sur la croissance des cellules. Dans ce cas, quatre flacons de cellules à la même concentration sont mises en place; un sans aucune drogue comme un contrôle, et un pour chacun des trois médicaments. Les cellules sont retirées des flacons à intervalles réguliers, par exemple tous les jours, comptées et enregistrées. Les nombres de cellules sont tracées sur un graphique en fonction du temps; les effets des médicaments sur la croissance cellulaire peut être comparé au contrôle.

Instructions

Cellules

1 cellules Swirl doucement pour obtenir une suspension même. Enlever un volume de cellules, par exemple de 1,0 millilitre (ml) avec une pipette et transférer dans un tube à essai. Diluer cellules pour donner 100.000 à 500.000 cellules par ml - ce qui devrait fournir les environ 100 cellules nécessaires à la signification statistique lors du comptage.

2 Diluer les cellules, le cas échéant, en y ajoutant 9,0 ml de milieu à la dose de 1,0 ml de cellules. Mélanger et enregistrer la dilution. Si les cellules sont encore trop concentrées, retirer 1,0 ml de cellules diluées dans un nouveau tube, ajouter 9,0 ml de milieu, mixer et enregistrer la dilution. les cellules mammaliennes croissent généralement dans l'intervalle de 100 000 à 5 millions par ml, de sorte que 0 à 2 dilutions doivent être suffisantes.

3 Mélanger les cellules provenant de la dilution finale. Retirer un petit volume, comme 0,1 ml, et les placer dans un nouveau tube. Ajouter un volume égal de bleu trypan, mixer et enregistrer la dilution. Les cellules mortes prennent bleu trypan et apparaîtront bleu sous le microscope.

Compte

4 Polonais l'hématimètre et lamelle avec du papier de verre, et la place sur la grille de lamelle hemocytameter. Ajouter une goutte de cellules diluées à la forme en V à côté de la grille. Les cellules se déplacent sous la lamelle couvre-objet par action capillaire.

5 Placez la lame sur microscope, se concentrer sur la grille et utiliser tally main compteur pour compter les cellules viables, pas bleu,. Les cellules ne doivent pas se chevaucher; si elle est trop dense, effectuer une autre dilution. Si les cellules sont trop diluée, préparer un échantillon plus concentré.

6 Retirez le hématimètre, propre, recharger, et compter à nouveau. Comptez chaque échantillon de cellules à trois reprises.

Calcul

7 Calculer le nombre de cellules par ml. La grille d'hémocytomètre est divisé en 9 grands carrés, chacun avec un volume de 0,1 ml.

8 Diviser le nombre de cellules comptées par le nombre de grands carrés utilisés (neuf si vous utilisez l'ensemble de la grille), et multiplier par 10 000 pour obtenir des cellules par ml. Multiplier par le facteur (s) de dilution pour que la concentration finale.

9 Notez la date, l'échantillon, le nombre de cellules, les facteurs de dilution et nombre final de cellules par ml. Préparer un graphique du nombre de cellules en fonction du temps pour montrer la croissance cellulaire.